鏈霉素,二氫鏈霉素,壯觀霉素和新霉素檢測方法

1．分析目標化合物

二氫鏈霉素和鏈霉素 、壯觀霉素、新霉素                        

                                                                           2．儀器設備

高效液相色譜—質譜儀。

 

3．試劑

七氟丁酸：七氟正丁酸

庚磺酸鈉：1－庚磺酸鈉（特級）

1％的偏磷酸溶液

甲醇

 

4．標準品

硫酸二氫鏈霉素: 本品1.000mg含720µg以上效價的二氫鏈霉素。

硫酸鏈霉素:本品1.000mg含718µg以上效價的鏈霉素。

硫酸新霉素: 本品1.000mg含680µg以上效價的新霉素。

鹽酸壯觀霉素：本品1.000mg含603µg以上效價的壯觀霉素。

5．試驗溶液的制備

a 提取方法

①肌肉、脂肪、肝臟和腎臟

肌肉：盡可能除去脂肪，攪碎混合均勻后，稱取其5.00g。

脂肪：盡可能除去肌肉，攪碎混合均勻后，稱取其5.00g。

肝臟和腎臟：攪碎混合均勻后，稱取其5.00g。

加入25mL 1％的偏磷酸溶液，攪拌3分鐘后，以每分鐘3000轉離心分離10分鐘，脫脂棉過濾。

②奶

稱取5.00g樣品，加入25mL 1％的偏磷酸溶液，攪拌3分鐘后，用振蕩器激烈振蕩5分鐘，以每分鐘3000轉離心分離10分鐘，脫脂棉過濾。

③蛋

除去蛋殼，充分均勻后，稱取其5.00g，加入25mL 1％的偏磷酸溶液，攪拌均勻后，以每分鐘3000轉離心分離10分鐘，脫脂棉過濾。

b、凈化方法

在十八烷基甲硅烷基化硅膠小柱(500mg)中，依次注入5mL甲醇和10mL水，舍去流出液。柱中依次注入a 提取方法所得到的溶液和5mL水，流出液中加入2mL 0.1mol／L庚磺酸鈉。柱中再依次注入5ml甲醇和10mL水，舍去流出液。依次注入前面加入了庚磺酸鈉的溶液和5mL水，舍去流出液。柱中注入10mL甲醇，收集流出液于磨口減壓濃縮器中，40℃以下除去甲醇。殘留物中加入1.0mL乙腈：0.005mol／L七氟丁酸溶液（1：9）混合溶液溶解，此為試驗溶液。

6、操作方法。

a 定性試驗

按下列操作條件進行試驗，試驗結果應與標準品的一致。

操作條件

柱填充劑：十八烷基甲硅烷基化硅膠。

柱：內徑1.0～6.0mm、長10～150mm不銹鋼管。

柱溫：40℃

流動相：乙腈：0.005mol／L七氟丁酸溶液(1：9)混合溶液。調整流速使壯觀霉素約10分鐘流出。

b 定量試驗

根據與a 定性試驗相同的試驗條件所得的試驗結果，峰高法或峰面積法定量。

7．定量限

二氫鏈霉素：0.02 mg/kg

鏈霉素：    0.02 mg/kg

壯觀霉素：  0.02 mg/kg

新霉素：    0.02 mg/kg

8．注意事項

（1）試驗溶液的制備

凈化方法采用的十八烷基甲硅烷化硅膠小柱，應預先采用標準品在保證確定的保持、溶出性能和凈化效果時，確證二氫鏈霉素定量限在0.02mg/kg以下；鏈霉素定量限在0.02mg/kg以下；壯觀霉素定量限在0.02mg/kg以下；新霉素定量限在0.02mg/kg以下。另外，用標準品進行添加回收試驗，確證十八烷基甲硅烷化硅膠小柱的凈化效果和回收率（90～100％）。

（2）標準溶液的制備

① 將相當于二氫鏈霉素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為二氫鏈霉素的標準原液（二氫鏈霉素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。

②將相當于鏈霉素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為鏈霉素的標準原液（鏈霉素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。

③將相當于壯觀霉素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為壯觀霉素的標準原液（壯觀霉素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。

④將相當于新霉素10.0mg（效價）的標準品溶解在水中，作為新霉素的標準原液（新霉素100mg（效價）/L）。該標準原液保存在-20℃，6個月內穩定。

⑤ 用甲醇遞減稀釋二氫鏈霉素、鏈霉素、壯觀霉素和新霉素各標準原液，作為制作標準曲線的標準溶液。