1、制備底層培養基:取直徑為90mm平皿,注入約15mL-20mL加熱融化的培養基(其中塑料平皿加入15mL,玻璃平皿加入20mL),使其在平皿底部均勻攤布,放置在水平臺面上使其凝固,作為底層;
2、制備菌層 :另取適量培養基加熱融化后,放冷至48-50℃(芽孢可至60℃),加入適量的菌懸液(能得到清晰的抑菌圈為度),搖勻,用移液器(槍頭滅菌)吸取5 mL上述培養基快速注入平皿中央,按同一方向輕輕搖動平皿使其在底層上均勻攤布,作為菌層(注意事項:菌層培養基表面一定要平整,否則會導致漏液)放置在水平臺上冷卻;
3、放置HB四連式牛津杯 :用無菌鑷子夾住HB四連式牛津杯正面的凸點(中央有凸點且平衡翼上標有“海博生物”字體的為產品正面),將其放置在菌層培養基表面上,將壓杯板蓋上,壓住牛津杯5秒左右,使4個小杯與培養基表面緊密接觸,防止出現縫隙導致漏液,然后小心拿走壓杯板(壓杯板已經輻照滅菌,可以直接使用;多次使用,可用酒精棉擦拭即可);
4、加入抗生素,進行培養 :向小杯中加入抗生素,將平皿平穩轉移至培養箱培養(轉移過程中輕拿輕放,避免劇烈震動)……
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